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折疊濾芯微濾膜酶活性的測定

時間：2018-10-12 11:31 點擊量（liàng）：次

折疊（dié）濾芯微濾膜酶活性的測定
常常利用同位素示蹤（zōng）法來測定參與生物高分子合成的酶活性，即利用標記小分了底物和（hé）酶保溫，然後把放射性的（de）小發子(底物)和放（fàng）射性大（dà）分子(產物)分開（kāi）。這一般用酸或有機溶劑沉澱來完成(沉澱蛋白質一般用（yòng）三氯醋酸，沉澱核酸常用過氯酸)。這裏在，用微孔濾膜過（guò）濾可以簡便快速地把沉澱產物完全收集（jí）在濾膜上，然後充分洗滌除去未摻入的小分（fèn）子放射性底物，最後幹燥濾膜，直接溶於閃爍液中進行均相測定（dìng）或懸（xuán）浮在閃爍液中進行非均相測定。降（jiàng）解大分子的酶也可以（yǐ）用微孔濾膜技術來測（cè）定活性。例如測定DNA內切酶活性時，用酸沉澱法不（bú）夠滿意，因為產物中也包括較大分子的寡核（hé）苷酸，而它（tā）也和酸不溶性底物一起沉澱出來，為了精確測定核酸內切酶活性，酶反應混合物直接用Schleicher&Schuell廠生產的A型硝酸纖維素酯濾（lǜ）膜過（guò）濾，它（tā）隻滯留大分子而不滯留寡核（hé）苷酸（suān），能把產物和底物分離得比較徹底，結果是比較滿（mǎn）意的。
在原則上（shàng），凡是能把一種放射性前體轉移或摻入到一種能選擇性沉澱形式產物的酶中，都能用微孔濾膜技術測定（dìng）活性。
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